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毕业论文网 > 开题报告 > 化学化工与生命科学类 > 食品质量与安全 > 正文

微型COI条形码在我国市场常见鱼类品种鉴定中的应用开题报告

 2020-07-19 06:07  

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

1.1 鱼类产品现状

1.1.1我国鱼类产品市场现状

我国是水产养殖大国。据《2016年渔业统计年鉴》统计,2015年,全国水产品总产量为6901.25万吨,比上年增长3.01%。其中,养殖产量5142.39万吨,占总产量的74.51%,全国水产品人均占有量达到49.91千克,比上年增加1.17千克、增长2.40%[1]

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1.研究的内容

(1)市场采集的共140份硬骨鱼类的DNA提取

(2)通用引物扩增COI条形码

(3)序列分析与物种鉴定

2.主要的研究手段

(1)DNA的提取(图1);

图1 DNA提取方法

(2)COI条形码的扩增(表1);

表1 COI条形码通用引物序列

Primer name

Primer sequence (5′-3′)

Barcode length (bp)

mlCOIintF (F)

TGTAAAACGACGGCCAGTGGWACWGGWTGAACWGTWTAYCCYCC

313bp

jgHCO2198 (R)

CAGGAAACAGCTATGAC TAIACYTCIGGRTGICCRAARAAYCA

M13F-29

CACGACGTTGTAAAACGAC

NA

M13R

GGATAACAATTTCACACAGG

(3)扩增反应参数(表2);

表2 扩增反应参数

Initial Denaturation

Denaturation

Annealing

Extension

Final Extension

Number of Cycles

94℃ 3min

94℃ 30s

62℃ 30s

72℃ 60s

72℃ for 5 min

19

94℃ 30s

43℃ 30s

72℃ 60s

16

(4)序列进行分析

将PCR产物送至测序公司(金斯瑞生物科技,中国)进行测序。每个目标片段测序两次,进行两个方向相反方向的直接测序,且允许产生四个高质量的互补序列。 使用可获得的BioEdit v7.2.5软件(Ibis Biosciences,Carlsbad,CA,USA)对测序数据进行比对,使用Mega7.0.14软件绘制进化树。

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